Il test ELISA rileva numerose malattie, quindi è stato ampiamente utilizzato in medicina e non solo. Tuttavia, il test ELISA è meglio conosciuto per la sua diagnosi della malattia di Lyme. Cos'è il test ELISA? Come interpretare i risultati? Qual è il prezzo del test?
Sommario:
- Test ELISA: cosa rileva? Applicazione del test ELISA
- Test ELISA: che cos'è il test?
- Test ELISA e malattia di Lyme: quando eseguirlo?
- Test ELISA - prezzo. Quanto costa un test ELISA?
- Test ELISA - risultati. Possono essere falsi positivi?
- Test ELISA - risultati. Possono essere falsi negativi?
Il test ELISA, ovvero il test immunoassorbente legato all'enzima, è un metodo di laboratorio comunemente utilizzato che serve, tra gli altri. per la rilevazione quantitativa degli anticorpi nel sangue.
Per questo il test ELISA ha trovato applicazione nella diagnosi di malattie batteriche, come la borreliosi di Lyme.
Il vantaggio del metodo ELISA è la sua semplicità e la possibilità di una rapida implementazione nonché un'elevata sensibilità. Il metodo ELISA viene eseguito utilizzando speciali piastre di plastica con pozzetti riempiti, ad esempio, con proteine Borrelia (antigeni) e anticorpi monoclonali specifici, progettati per rilevare gli anticorpi nel campione del paziente.
Test ELISA: cosa rileva? Applicazione del test ELISA
L'elevata sensibilità e semplicità del metodo ELISA lo ha reso applicabile nella diagnosi di molte malattie, ma è meglio conosciuto come metodo diagnostico della malattia di Lyme.
Nel caso della diagnosi di borreliosi di Lyme, il cosiddetto ELISA indiretto, che consente di rilevare IgM o IgG specifiche nel materiale testato. Allo stesso modo, gli anticorpi possono essere rilevati per la diagnosi:
- infezioni virali: virus dell'herpes (herpes, virus dell'herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virus dell'epatite (HBV e HCV)
- infezioni da protozoi: toxoplasmosi, giardiasi
- malattie autoimmuni: celiachia (anticorpi anti-tTG o anti-DPG), malattia di Hashimoto (anticorpi anti-TG e anti-TPO), malattie infiammatorie intestinali (anticorpi anti-ASCA e anti-ANCA)
- malattie parassitarie e allergie in cui vengono rilevati anticorpi IgE specifici. Il loro livello aumentato può indicare la presenza di allergie, ad esempio ai pollini e al cibo, o un'invasione di parassiti (tenia armata, nematode umano)
Sono state inoltre apportate modifiche al metodo ELISA (il cosiddetto ELISA sandwich), che consentono la rilevazione di un campione di proteine diverse dagli anticorpi. Quindi lo scopo del test è rilevare nel materiale biologico:
- frammenti di virus o batteri, molto spesso sono antigeni caratteristici di un determinato patogeno
- ormoni sierici, ad es. estrogeni, prolattina, TSH, fT4, cortisolo
- enzimi, ad esempio calprotectina, elastasi pancreatica, fosfatasi alcalina
- marker tumorali, ad esempio CA-125
- la presenza di farmaci nel siero
Questo metodo è applicabile anche nell'industria alimentare, dove può rilevare tracce di allergeni (ad esempio latte, arachidi), OGM o tossine negli alimenti.
Test ELISA - di cosa si tratta?
La diagnosi, ad esempio, della borreliosi di Lyme utilizzando il metodo ELISA consiste nel rilevare le proteine immunitarie nel materiale biologico - anticorpi che si formano durante la risposta contro gli antigeni della Borrelia.
Gli anticorpi sono testati in due classi, IgM e IgG. Le IgM sono i primi anticorpi che compaiono nel corpo quando vengono a contatto con i batteri e diminuiscono nel tempo.
Il loro posto è preso da anticorpi IgG più persistenti che possono rimanere nel corpo per diverse dozzine di anni.
In questo modo, la presenza di batteri nell'organismo viene indirettamente testata rilevando anticorpi diretti specificamente contro le spirochete di Borrelia.
Gli anticorpi in vari stadi dell'infezione possono essere diretti contro una varietà di proteine Borrelia. Ad esempio, in una fase iniziale è la proteina p41.
Nelle fasi successive, iniziano ad apparire sempre più proteine, come p21, p30, p39, p43. Questo è il motivo per cui la diagnosi della malattia di Lyme è estremamente difficile.
La selezione delle proteine batteriche è estremamente importante affinché il test abbia un alto valore diagnostico. Pertanto, di routine nella diagnosi della malattia di Lyme, devono essere utilizzati test ELISA di II o III generazione in cui vengono selezionati set di proteine per ottenere il risultato più affidabile.
Test ELISA e malattia di Lyme. Quando farlo?
La borreliosi di Lyme è una malattia batterica causata dal batterio Borrelia burgdorferi e dalle sue numerose varietà.
La diagnosi della malattia non è semplice a causa della complessità della risposta immunitaria contro Borrelia e delle imperfezioni dei metodi di laboratorio.
Il metodo di laboratorio più comunemente utilizzato è il metodo ELISA altamente sensibile, che rileva gli anticorpi specifici prodotti contro le proteine batteriche.
Nella diagnosi della malattia di Lyme, viene utilizzato il metodo ELISA indiretto in cui si distinguono le seguenti fasi:
- incubazione dei pozzetti sulla piastra con materiale raccolto dal paziente, ad es. siero. Se sono presenti anticorpi contro Borrelia nel materiale testato, si attaccano alle proteine sul fondo del pozzetto di reazione
- quindi il siero in eccesso viene risciacquato con uno speciale liquido di lavaggio (tampone) e il cosiddetto coniugato, che è un anticorpo legato all'enzima che si lega agli anticorpi precedentemente collegati nei pozzetti di reazione
- quindi viene aggiunto il substrato per il coniugato e si verifica una reazione del colore (risultato positivo) o nessuna reazione del colore (risultato negativo)
- l'ultimo passaggio è la lettura da parte del lettore (spettrofotometro) della concentrazione di anticorpi contro Borrelia nel siero del paziente
Il test ELISA per la malattia di Lyme viene eseguito dal sangue e, in caso di sintomi neurologici (neuroborreliosi), anche dal liquido cerebrospinale.
Il liquido sinoviale non deve essere testato in quanto vi è un'alta probabilità di risultati falsi positivi.
La base per la diagnosi della malattia sono i sintomi clinici che lo indicano, confermati dai risultati degli esami di laboratorio.
L'aggiunta di un risultato di test di laboratorio senza sintomi non autorizza la diagnosi della malattia di Lyme, poiché è stato dimostrato che gli anticorpi contro Borrelia vengono rilevati anche nelle persone sane.
La diagnosi sierologica della borreliosi di Lyme inizia con un test ELISA di screening semiquantitativo. Se il risultato è negativo, significa che non sono state rilevate spirochete di Borrelia o il risultato è un falso negativo.
Se il risultato è positivo o debolmente positivo (dubbio), è necessario eseguire il test Western blot di conferma, caratterizzato da un'elevata specificità.
Questo per confermare che i risultati ELISA sono "veri". Durante la diagnostica, non è possibile saltare nessuno dei passaggi precedenti e, ad esempio, eseguire immediatamente una diagnosi utilizzando il metodo Western blot o effettuare una diagnosi basata solo su un risultato ELISA positivo.
In Polonia, la diagnosi della malattia di Lyme si conclude molto spesso nella prima fase di screening, il che causa un'errata interpretazione dei risultati positivi o debolmente positivi.
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Test di trasformazione dei linfociti (LTT) Buono a sapersiTest ELISA - prezzo. Quanto costa un test ELISA?
Il test costa circa 60 PLN e viene eseguito immediatamente. Tuttavia, puoi attendere circa tre mesi per i risultati del rinvio.
Test ELISA - risultati. Possono essere falsi positivi?
Risultati falsi positivi derivano dalla reattività crociata degli anticorpi IgM con altre proteine. Gli anticorpi prodotti dall'organismo possono riconoscere "erroneamente" un antigene di altri microrganismi come antigene Borrelia.
Gli "errori" più comuni si verificano nelle persone infette da treponema pallidum, herpesvirus e nelle persone con lupus eritematoso sistemico e altre malattie reumatiche.
Test ELISA - risultati. Possono essere falsi negativi?
Risultati falsi negativi possono comparire in una fase iniziale dell'infezione, nel qual caso il test deve essere ripetuto dopo circa 3-4 settimane. Questo è chiamato finestra sierologica, cioè il periodo iniziale di infezione in cui l'organismo non è ancora "riuscito" a produrre anticorpi specifici.
Lo stesso vale per le persone con immunodeficienza che non producono abbastanza anticorpi.
Un grosso problema, soprattutto nelle infezioni molto intense, è la comparsa del cosiddetto immunocomplessi costituiti da antigeni della Borrelia spirochete e anticorpi specifici per essi.
Di conseguenza, gli anticorpi diventano "invisibili" per i metodi comunemente usati come l'ELISA e, sebbene siano presenti nel materiale testato, non possono essere rilevati.
In questi casi, il laboratorio può utilizzare la scomposizione degli immunocomplessi. Questo trattamento è progettato per rilasciare gli anticorpi. Tuttavia, questo metodo non è ampiamente utilizzato a causa della mancanza di standardizzazione nei laboratori.
Vale la pena saperloPerché la diagnosi della malattia di Lyme non è facile?
Ciò è dovuto alla complessità della risposta immunitaria contro Borrelia e ai limiti dei metodi di laboratorio. La diversità delle varietà e l'emergere di nuove che causano infezioni, soprattutto nel continente europeo, non facilitano lo sviluppo di metodi diagnostici efficaci.
Altre varietà sono apparse recentemente in Europa, come Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana e Borrelia spielmanii. Inoltre, nel corpo, le spirochete di Borrelia possono trasformarsi in cisti o rimanere in luoghi del corpo inaccessibili alle cellule del sistema immunitario.
Essere così "invisibili" al sistema immunitario. Inoltre, è stato dimostrato che i tessuti possono contenere frammenti di batteri che hanno proprietà fortemente proinfiammatorie. Si ritiene che siano responsabili dei sintomi cronici della malattia di Lyme, nonostante i risultati negativi dei test di laboratorio.
Letteratura
1. Witecka-Knysz E. et al .. Malattia di Lyme: perché la diagnosi è così difficile? Diagnostica di laboratorio aprile 2007.
2. Moore A. et al ... Linee guida attuali, insidie cliniche comuni e indicazioni future per la diagnosi di laboratorio della malattia di Lyme, Stati Uniti. Emerg Infect Dis. 2016 luglio; 22 (7).
3. Diagnostica di laboratorio delle malattie trasmesse dalle zecche Raccomandazioni del gruppo di lavoro: Camera nazionale dei diagnostici di laboratorio, Istituto nazionale di sanità pubblica-Istituto nazionale di igiene, Consulente nazionale nel campo delle malattie infettive, Dipartimento di malattie infettive e neuroinfezioni, Università di medicina di Białystok, Società polacca di virologia, Varsavia 2014
4. Hosseini S. et al.: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) From A to Z. Springer 2017.
